冻存细胞如何有效复苏？

一般来说，细胞进行转移，最佳的方法是进行低温保存（-70℃~-196℃），而细胞进行低温保存的基本原理是：在-70℃以下时，细胞内的酶活性均已停止，即代谢处于停止状态，故而可以长期保存。

细胞低温保存的关键在于0~20℃阶段的处理过程，因为在此温度范围内，冰晶呈针状，极易招致细胞的严重损伤。

所以复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内融化，避免缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶，对细胞造成损伤。

1）所需材料

· 含有细胞的冻存管；

· 37℃水浴锅；

· 37℃预热的生长培养基；

2）细胞的复苏流程

1．佩戴眼镜和手套，从液氮罐中取出冷冻管；

2．迅速放入37℃水浴中，并不时摇动，在1分钟内使其融化，然后在无菌下取出细胞；

3．在150g速度下离心5～10分钟，弃去上层液；

4．加入适量培养液后接种于培养瓶中，接种浓度1×10 ⁹ cell/L，置37℃恒温箱静置培养；

5．次日更换一次培养液，继续培养，观察生长情况；

6．若细胞密度较高，及时传代。

3）注意事项

在细胞复苏时，应注意融化冻存细胞速度要快，要不时摇动冷冻管，使之尽快通过最易受损的温度段(-5～0℃)。这样复苏的冻存细胞存活率高，生长及形态良好。

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