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冻存细胞如何有效复苏

更新时间:2022-12-13      点击次数:664

冻存细胞如何有效复苏?

一般来说,细胞进行转移,最佳的方法是进行低温保存(-70~-196℃),而细胞进行低温保存的基本原理是:在-70℃以下时,细胞内的酶活性均已停止,即代谢处于停止状态,故而可以长期保存。

细胞低温保存的关键在于0~20℃阶段的处理过程,因为在此温度范围内,冰晶呈针状,极易招致细胞的严重损伤。

所以复苏细胞应采用快速融化的方法,这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内融化,避免缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶,对细胞造成损伤。

1)所需材料

· 含有细胞的冻存管;

· 37℃水浴锅;

· 37℃预热的生长培养基;

2)细胞的复苏流程

1.佩戴眼镜和手套,从液氮罐中取出冷冻管;

2.迅速放入37℃水浴中,并不时摇动,在1分钟内使其融化,然后在无菌下取出细胞;

3.在150g速度下离心510分钟,弃去上层液;

4.加入适量培养液后接种于培养瓶中,接种浓度1×10 9 cell/L,置37℃恒温箱静置培养;

5.次日更换一次培养液,继续培养,观察生长情况;

6.若细胞密度较高,及时传代。

3)注意事项

在细胞复苏时,应注意融化冻存细胞速度要快,要不时摇动冷冻管,使之尽快通过最易受损的温度段(-50)。这样复苏的冻存细胞存活率高,生长及形态良好。

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