脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)是从新生儿脐带中提取的一种具有多潜能分化能力的干细胞。脐带来源的间充质干细胞不仅保持了间充质干细 胞的生物学特性(表面抗原标记物,具有分化为成骨细胞、软骨细胞及脂肪细胞等能力),而且相对于其它来源的间充质干细胞更加安全,更加原始,细胞的增殖、分化及免疫调节能力更强。
此外脐带间充质干细胞还具取材方便易于分离、免疫原性低、无道德伦理问题限制、可获得的细胞数量多、可实现大规模标准化生产等特征,拥有广阔的临床应用前景。本产品经过严格的质量控制和检测,确保其安全性和有效性。
(1)当细胞密度达80%-90%即可进行传代(注意细胞不能太密集,否则容易分化),弃去培养上清,用不含钙、镁离子的DPBS润洗细胞1-2次;
(2)加1mL重组胰酶于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,置于37℃培养箱中消化1-3min,在显微镜下观察,直到细胞大部分细胞变圆并脱落 (视细胞情况而定)。
(3)加后装入无菌离心管中,1000rpm离心5min,弃入3ml MSC培养基终止消化。轻轻打匀去上清液,补加1-2ml MSC培养基后吹匀。
(4)按照1:3或者1:4的比例进行传代,或者细胞计数后以5-8×103cells/cm2 浓度接种至新的培养瓶中,补充相应体积的MSC培养基后,置于37℃,5%CO2培养箱中培养。
(5) 每2-3天换一次液,培养到2-4天待细胞生长密度达到80%左右,进行后续的传代或者冻存操作。
消化时间:胰酶消化需控制在1分钟左右,避免过度消化导致细胞损伤。
接种密度:按底面积1:3至1:4比例传代,避免过密或过稀。
代次选择:建议使用低代次细胞(如P2代)以保证实验效果。
专用培养基:使用含生长因子的专用培养基,促进细胞增殖和分化。