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兰伯艾克斯|细胞培养中应注意的问题

更新时间:2023-08-23      点击次数:467


培养基为什么偏紫色

为了方便观察和感知培养液的状况,我们可以在培养基中加入酚红指示剂。酚红指示剂对于pH值在6-8范围内非常敏感,呈现出从黄色到紫红色的变化。当培养液偏酸时,酚红会呈现偏黄色;而当培养液偏碱性时,酚红会呈现偏紫色。


通常情况下,当培养液变成黄色时,这可能是由于细菌或细胞过度增长,产生了酸性物质。而当培养基保存在4℃冰箱中,二氧化碳会逐渐溢出,导致pH偏碱性,从而使培养基呈现偏紫色。对于呈现偏紫色的培养基,我们可以通过通入经无菌过滤的二氧化碳来调整pH值后继续使用。


然而,长时间未使用完的碱性培养基不建议继续使用,因为它可能导致细胞生长停滞或死亡。以上是针对培养液颜色变化的一些解释和建议。根据具体情况,可能需要进一步调整和优化处理方法。


细胞培养的注意问题

1. 在细胞培养液中加入HEPES可以稳定液体的pH值。HEPES的全称是N’-a-hydroxythylpiperazine-N’-ethanesulfanic acid,它是一种氢离子缓冲剂,可以在较长时间内维持恒定的pH范围。HEPES对细胞没有毒性作用,一般的细胞培养液中含有20mmol/L的HEPES即可达到缓冲能力。


2. 使用培养基颜色变化作为换液的指标是一个实用但不准确的方法。在培养液中加入了指示剂酚红,液体的颜色变化可以间接提示细胞生长的状态。当细胞生长旺盛时,会产生酸性物质,导致液体呈黄色;相反,液体会呈紫红色。但是,仅凭颜色变化来判断细胞生长状态是不够的,还需要结合其他指标进行细胞观察和评估。


3. pH值变化大会对细胞产生伤害,不利于细胞生长。


4. 不是所有的细胞培养基都适用相同的CO2浓度。CO2浓度的选择取决于培养基中NaHCO3的浓度。CO2和溶液中的HCO3-形成缓冲体系,使整个培养体系的pH值维持在弱碱性(约为7)。当培养基暴露在空气中时,HCO3-会迅速分解,导致pH值快速升高,从红色变为紫色。当将培养基放入细胞培养箱中,在CO2的作用下,pH值会缓慢地从紫色变回红色。


不同细胞培养基的NaHCO3浓度不同,使用不同细胞培养基时应选择相应的CO2浓度。具体选择的CO2浓度如下:


当NaHCO3浓度<1.5g/L时,所需CO2浓度为4%;当NaHCO3浓度处于1.5-2.2g/L之间时,所需CO2浓度为5%;


当NaHCO3浓度处于2.2-3.4g/L之间时,所需CO2浓度为7%;


当NaHCO3浓度>3.5g/L时,所需CO2浓度为10%。



当我们发现培养液的pH值在细胞不断生长过程中发生异常变化时,我们应该采取以下措施:



1. 检查二氧化碳浓度是否适当:根据培养基中的碳酸氢钠浓度,调整培养箱中二氧化碳的百分比。对于2.0至3.7 g/L的碳酸氢钠,使用5-10%的二氧化碳浓度。或者考虑使用不依赖二氧化碳的培养基。


2. 检查培养瓶盖是否太紧:将瓶盖松开1/4圈。


3. 确保碳酸氢盐缓冲充分:加入HEPES缓冲液,使最终浓度达到10-25 mM。


4. 检查培养基中的盐是否正确:在CO2条件下使用Earle's盐培养基,在常气环境下使用Hanks'盐培养基。


5. 检查是否有细菌、酵母或真菌污染:将培养物和培养基丢弃,尝试去除污染的培养物。以上是处理培养液pH异常变化的一些常见方法,根据具体情况,可能需要进一步调整和优化处理方法。



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